மூலக்கூறு உயிரியல் ஆராய்ச்சி முறைகள் மற்றும் அவற்றின் பயன்பாடு

மூலக்கூறு உயிரியல் ஆராய்ச்சி முறைகள் நவீன மருத்துவம், தடய அறிவியல், மற்றும் உயிரியலில் ஒரு முக்கிய பங்கு வகிக்கின்றன. டிஎன்ஏ மற்றும் RNA ஆய்வில் முன்னேற்றங்கள் நன்றி, நபர் அமிலங்கள், முதலியன ஒரு கலவையை தேவையான நியூக்ளிக் அமிலம் அங்கீகரிக்க, முகவரை உயிரினத்தின் மரபணு ஆராய தீர்மானிக்க முடியும்

மூலக்கூறு உயிரியல் முறைகள். அது என்ன?

மீண்டும் விஞ்ஞானிகள் 70-80s உள்ள அர்த்தப்படுத்திக் கொள்வது முதல் இருந்தது மனித மரபணு. இந்த நிகழ்வு மரபணு பொறியியல் மற்றும் மூலக்கூறு உயிரியல் வளர்ச்சி உத்வேகம் அளித்தன. டிஎன்ஏ மற்றும் RNA ஆகியவை பண்புகள் ஆய்வு அது நோய் கண்டறிதல், ஆய்வு மரபணுவின் நோக்கத்திற்காக இந்த நியூக்ளிக் அமிலங்கள் பயன்படுத்த இப்போது சாத்தியம் என்பதையும் குறிக்கும்.

டிஎன்ஏ மற்றும் RNA தயாரித்தல்

மூலக்கூறு உயிரியல் கண்டறியும் முறைகள் பெரும்பாலும் இந்த: பொருள் தொடங்கி தேவைப்படுகிறது நியூக்ளிக் அமிலம். வாழும் உயிரினங்களில் உள்ள செல்கள் இருந்து இந்த பொருட்களில் தேர்ந்தெடுக்க பல வழிகள் உள்ளன. ஒவ்வொரு அதன் நன்மைகளும் குறைபாடுகளும் உள்ளன, மற்றும் தூய வடிவில் நியூக்ளிக் அமிலங்கள் பிரித்தெடுத்து ஒரு முறை தேர்ந்தெடுக்கும் போது அது கருத வேண்டும்.

Marmur மூலம் டிஎன்ஏ 1. தயாரிப்பு. முறை, ஆல்கஹால் ஆகியவற்றின் கலவையாகும் சிகிச்சையளிப்பதில் கொண்டுள்ளது விளைவாக தூய டிஎன்ஏ வீழ்ச்சியடையச். இந்த முறை எதிர்மறையாக அரிக்கும் பொருட்கள், இது பினோலில் மற்றும் குளோரோபார்ம் பயன்படுத்துவது ஆகும்.

பூம் மீது டிஎன்ஏ 2. தனிப்படுத்தல். இங்கே பயன்படுத்தப்படுகிறது என்று முக்கிய பொருள் - guanidine thiocyanate (GuSCN) ஆகும். அது படிவு ஊக்குவிக்கிறது டியாக்சிரிபோனுக்லீயிக் அமிலம் அதில் இருந்து இருப்பினும் அதன் பின்னர் சிறப்பு தாங்கல் மூலம் சேகரிக்கப்பட்ட முடியும் சிறப்பு சரிவின் கொண்டிருந்தது. எனினும் GuSCN - டிசிபி இன் வினைத்தடுப்பானாக இருக்கிறது, அந்த கூட ஒரு சிறிய பகுதியை டிஎன்ஏ டெபாசிட் விடும் நியூக்ளிக் அமிலங்கள் பணியாற்றும் போது முக்கியமான பாலிமரேஸ், நிச்சயமாக பாதிப்பை ஏற்படுத்தக்கூடும்.

தூய்மையின்மைகளைக் 3. மழை. முறை என்று மூலக்கூறுகள் தங்களை dehoksiribonukleinovoy அமிலம் மற்றும் அசுத்தங்கள் டெபாசிட் இல்லை முந்தைய தான் வேறுபடுகிறது. இதை செய்ய, அயனி பரிமாற்றங்கள் பயன்படுத்த. அனுகூலமற்ற இல்லை அனைத்துப் பொருள்களுக்கும் குடியேற முடியும்.

4. மாஸ் திரையிடல். நீங்கள் டிஎன்ஏ மூலக்கூறு அமைப்பு, மற்றும் சில புள்ளிவிவரங்களைப் பெற தேவை பற்றிய துல்லியமான தகவல் தேவையில்லை போது இந்த முறை நோயாளிகளுக்குப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. காரணம் சவர்க்காரம், குறிப்பாக alkalies கையாளும் போது நியூக்ளிக் அமிலம் அமைப்பு சேதமடைந்த முடியும் என்று உள்ளது.

ஆராய்ச்சி முறைகள் வகைப்பாடு

ஆராய்ச்சிகள் அனைத்தையும் மூலக்கூறு உயிரியல் முறைகள் மூன்று முக்கிய குழுக்களாக பிரிக்கப்படுகின்றன:

1. பெருக்கம் (என்சைம்களோடு பன்முக பயன்படுத்தி). நோயறிதல் முறைகள் பல முக்கிய பங்காற்றுகிறது பாலிமரேஸ், - இந்த பிசிஆர் அடங்கும்.

2. Neamplifikatsionnye. முறைகள் இந்த குழு நியூக்ளிக் அமிலம் கலவைகள் வேலை நேரடியாக தொடர்புடையதாக உள்ளது. எடுத்துக்காட்டுகள், 3 வகையான blots உள்ளன இயற்கையான கலப்புப்பிறப்பாக்கலில் போன்றவற்றில்

3. ஒரு குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்.என்.ஏ ஆய்வு இணைக்கும் ஆய்வு மூலக்கூறை இலிருந்து சமிக்ஞை அங்கீகாரம் அடிப்படையில் முறைகள். எடுத்துக்காட்டாக - கலப்பினப் அமைப்பு Hybride பிடிப்பு சிஸ்டம் தீர்வு (hc2).

மூலக்கூறு உயிரியல் ஆராய்ச்சி முறைகள் பயன்படுத்த முடியும் என்று என்சைம்கள்

பல மூலக்கூறு கண்டறியும் நுட்பங்கள் நொதிகள் பரந்த அளவிலான பயன்படுத்தி உள்ளடக்கியது. கீழே பெரும்பாலும் பயன்படுத்தப்படுகின்றன:

1. கட்டுப்பாடு நொதி - தேவையான பாகங்கள் DNA மூலக்கூறுகளில் "வெட்டி".

2. டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் - ஒரு இரட்டை தனித்திருக்கும் டியாக்சிரிபோனுக்லீயிக் அமிலம் மூலக்கூறு தொகுக்கின்ற.

3. பின்னோக்கு ட்ரான்ஸ்கிரிப்டேசுக்குக் (தலைகீழாக ட்ரான்ஸ்கிரிப்டேசுக்குக்) - ஒரு ஆர்என்ஏ டெம்ப்ளேட் இருந்து டிஎன்ஏ-யைத் பயன்படுத்தப்படும்.

4. டிஎன்ஏ ligase - நியூக்ளியோடைட்கள் இடையே phosphodiester பத்திரங்கள் உருவாவதற்குக் காரணமாக உள்ளது.

5. exonuclease - டியாக்சிரிபோனுக்லீயிக் அமிலம் மூலக்கூறின் இறுதியில் பகுதிகளைச் நியூக்ளியோடைட்கள் நீக்குகிறது.

பிசிஆர் - டிஎன்ஏ பெருக்கத்தின் அடிப்படை வழிமுறையானது

பாலிமரஸ் தொடர் ரியாக்ஷ்ன் (PCR) பரவலாக நவீன மூலக்கூறு உயிரியல் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இந்த முறை, இதில் ஒற்றை DNA மூலக்கூறு நகல்கள் (பன்மடங்காகிக் மூலக்கூறு) ஒரு பெரிய எண்ணை அடையலாம்.

பிசிஆர் முக்கிய செயல்பாடுகளை:

- நோய்களின் நோயறிதல்;

- மரபணு டிஎன்ஏ பிரிவுகளில் குளோனிங்.

பாலிமரேஸ் பின்வரும் உறுப்புகள் தேவைப்படுகிறது முன்னெடுக்க: ஆரம்ப டிஎன்ஏ மூலக்கூறை ஒரு புட்டி டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் (Taq அல்லது Pfu), deoxyribonucleotide பாஸ்பேட் (நைட்ரஜன் தளங்கள் ஆதாரங்கள்), கலங்களுக்கு (2 அறிமுகம் 1 டிஎன்ஏ மூலக்கூறு) மற்றும் தன்னை நடத்தலாம் ஒரு தாங்கல் அமைப்பு அனைத்து வினைகள்.

இயல்புநீக்கம், அறிமுகம் தூண்டு மற்றும் நீட்சி: பிசிஆர் மூன்று நிலைகளைக் கொண்டுள்ளது.

1. இயல்புநீக்கம். 94-95 டிகிரி செல்சியஸ் proshodit ஒரு வெப்பநிலையில் டிஎன்ஏ இரண்டு சங்கிலிகள் ஹைட்ரஜன் பிணைப்பு உடைக்க, அதன் விளைவாக நாம் இரண்டு ஒற்றை தனித்திருக்கும் மூலக்கூறுகள் கிடைக்கும்.

2. காய்ச்சிப்பதனிட்டகம்பி கலங்களுக்கு. 50-60 டிகிரி வெப்பநிலையில் சென்டிகிரேட் நிரப்புத்தன்மையானது வகையைப் பொறுத்து ஒற்றை தனித்திருக்கும் நியூக்ளிக் அமிலம் மூலக்கூறுகளின் முனைகளிலும் இணக்கத்திற்கான கலங்களுக்கு ஏற்படுகிறது.

3. நீட்சி. 72 டிகிரி வெப்பநிலையில் செயற்கையாக மகள் இரட்டை டியாக்சிரிபோனுக்லீயிக் அமிலம் மூலக்கூறுகள் தனித்திருக்கும் உள்ளது.

டிஎன்ஏ வரிசைமுறை

மூலக்கூறு உயிரியல் ஆராய்ச்சி முறைகள் பலதடவை டியாக்சிரிபோனுக்லீயிக் அமிலம் மூலக்கூறிலான நியூக்ளியோடைட்களின் வரிசை அறிவு தேவைப்படும். தீர்மானிக்க மரபணு குறியீடு வரிசைமுறை. எதிர்கால மூலக்கூறு கண்டறியும் மனித வரிசை உறுதியை பெற்றது அறிவு சார்ந்ததாக இருக்காது.

வரிசைமுறை பின்வரும் வகையான:

• Maxam-கில்பர்ட் மூலம் வரிசைமுறை;
• சன்கெர் வரிசைமுறை;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe வரிசைமுறை.